Тест молекулярного кариотипа - флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)
Одним из методов молекулярной цитогенетики является флуоресцентная гибридизация in situ (FISH). Благодаря кариотипированию супружеской пары, предлагаемому на сайте https://ivf.com.ua/genetics/research-for-planning-pregnancy/karyotyping-couple/ можно визуализировать отдельные фрагменты генетического материала, обнаруженные дополнительными зондами, меченными флуоресцентными красителями.
Изначально ход теста очень похож на процедуру классического цитогенетического теста, благодаря которому ядра получают на предметном стекле без цитоплазмы. Затем их фиксируют и подвергают воздействию высокой температуры (что приводит к денатурации ДНК) и инкубации с данным молекулярным зондом. Меченый молекулярный зонд гибридизуется с определенным фрагментом ДНК (можно использовать несколько зондов, меченных разными флуоресцентными красителями одновременно). Затем избыток неиспользованного зонда удаляется, а исследуемый материал анализируется под флуоресцентным микроскопом.
FISH-тест считается прекрасным дополнением к классическому цитогенетическому тесту и используется в первую очередь для диагностики рака, диагностики микроделеционных синдромов или как часть предимплантационной и пренатальной диагностики.
Молекулярный анализ кариотипа методом аCGH состоит из нескольких этапов:
- выделение испытуемого ДНК,
- маркировка ДНК пациента и правильной эталонной ДНК с использованием различных флуоресцентных маркеров,
- гибридизация эталонной ДНК и ДНК пациента с молекулярными зондами на микрочипах,
- смывание несвязанной флуоресценции и определение уровня флуоресценции, испускаемой эталонной ДНК и испытуемого ДНК,
- проведение биоинформатического анализа изображения микрочипа.